GPCR活性检测技术实践中难题解析

GPCR（G蛋白偶联受体）作为细胞信号传导的核心分子，在药物研发和基础研究中具有极为重要的地位。作为人体中最大的膜受体超家族，GPCR参与了绝大多数生理过程和病理机制，并广泛分布于各个组织器官。GPCR活性检测技术是研究GPCR信号转导、功能机制以及药物筛选的关键手段。

这些技术通过检测GPCR激活后引发的细胞内信号变化，帮助科研人员深入了解受体的活性状态、信号传导路径以及与配体的相互作用。美迪西云讲堂邀请侯利苹博士为大家解答GPCR细胞活性检测技术遇到的问题。

如果你也有关于GPCR的问题，可以观看侯利苹博士云讲堂视频回放！

1、cAMP是很小的分子，并且在体内是天然存在的，怎么获得cAMP的抗体的？   

侯利苹博士：小分子通常被定义为半抗原，本身难以刺激机体产生免疫反应，也不容易诱导抗体生成。为了获得针对小分子的抗体，一般是将小分子（如cAMP）与大分子载体（如BSA）结合，使其能够被免疫系统识别，然后免疫动物并利用杂交瘤技术获得单克隆抗体。

2、美迪西是否对外承接GPCR细胞株构建服务。一般需要多久？

侯利苹博士：我们可以承接GPCR细胞株构建业务，在构建细胞株的过程中，首先需要进行慢病毒质粒合成，这个一般需要2到3周，完成质粒合成后，我们进入病毒包装阶段，这一过程大约需要1周。接下来构建混合克隆，我们需要进行抗生素筛选和扩增，这一阶段大约需要2周，获得混合克隆是6周。如果后续检测需要单克隆细胞，我们将使用流式细胞仪将细胞分选至96孔板中进行培养。单克隆细胞的生长和扩增过程大约需要1个月，之后的扩增和检测需要2周。

因此，整个时间周期为：质粒合成一般2-3周，病毒包装1周，混合克隆筛选2周，单克隆筛选6周，即拿到混合克隆6周，拿到单克隆12周。

3、钙流检测实验中，细胞密度为什么选择5,000细胞/孔？

侯利苹博士：5,000细胞/孔是我们常用的密度。由于钙流检测需要读取光信号，细胞需要均匀铺满孔底，避免密度过高导致信号干扰。当然，根据细胞类型和实验需求，这一密度也可以根据细胞密度适当调整。

如果您对于新药研发临床前研究过程中有一些困惑或者想要深入了解的专题内容，可以留下您的问题和建议，美迪西希望和您一起，探索新药研发的奇妙世界。